产品货号：
ALH601
中文名称：
血清miRNA提取试剂盒
英文名称：
Serum microRNA Extraction Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
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本试剂盒适用于从动物血清样本中纯化包括miRNA的无细胞总RNA。本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清RNA酶，强烈有机抽提去除蛋白和DNA，RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜，再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质进一步去除，最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15～30核苷酸左右大小RNA（包括siRNA和miRNA）的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收，酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA，对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。
- 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
- 也不需要异丙醇或者乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。
- 特殊的裂解液配方，可以处理更多的血清样品。
- 多次柱漂洗确保高纯度，可用于RNAi，RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
| 组分 | 规格 |
| Lysis buffer | 50mL |
| Wash Solution 1 | 12mL |
| Wash Solution 2/3 | 10mL |
| RNase-free H2O | 10mL |
| RNase-free吸附柱RA和收集管 | 50套 |
| 说明书 | 1份 |
保存：室温，有效期6个月，其中Lysis buffer尽量置于4℃避光保存。
- 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
- 不合适的储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃～25℃）进行。
- Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，直接不吸晶体，吸上清使用就可以。
- 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
- Wash Solution 1第一次使用前加入28mL无水乙醇，Wash Solution 2/3第一次使用前加入42mL无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
- 除说明外，所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
- 需要自备乙醇，氯仿。
- Lysis buffer和Wash Solution 1含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
- RNA纯度及浓度检测：
一般情况下通过测量OD260值可以知道RNA产量，测量OD260/OD280比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一，但是由于血清/血浆的RNA含量特别低，已经低于分光光度计测量的下限，无法测量准确，因此一般无法通过测量OD值或者比值的方法来判断纯度或者浓度，只能通过下游做荧光定量RT-PCR来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA主要是小于100nt的小RNA，因此传统的电泳检测RNA完整性并不适用于血清/血浆RNA。
- 每250μL样品(血清)加入750μL Lysis buffer，涡旋振荡或者用加样枪吹打液体样品几次混匀帮助裂解。
对于含有高污染物样品如高蛋白高血脂样品，可以适当减少处理量，不足的体积，可以用去RNase-free H2O补足。Lysis buffer和液体样品的终体积比总是3：1。例如200μL样品+50μL RNase-free H2O+750μL Lysis buffer。 - 将样品剧烈震荡混匀，在15～30℃条件下孵育5分钟。
- 每750μL Lysis buffer加200μL氯仿，剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。
- 于4℃12000rpm离心10分钟，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加Lysis buffer体积的70%。
- 小心取上清（精确计算体积）转入到新的离心管，加入1.5倍体积的无水乙醇（必须是室温的），涡旋混匀。此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心，立刻接下步。
- 将混合物(每次小于700μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12000rpm离心30～60秒，弃掉废液。
- 加700μL Wash Solution 1（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30秒，弃掉废液。
- 加入500μL Wash Solution 2/3（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30秒，弃掉废液。加入500μL Wash Solution 2/3，重复一遍。
- 将吸附柱RA放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
- 取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30～40μL RNase free water（事先在100℃水浴中预热效果更好），室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟。
洗脱液加回到吸附柱重复洗脱一遍可以提高产量和浓度(如果需要RNA浓度高)。如果需要提高浓度，洗脱体积最小可以低至15μL，但是使用小体积洗脱会降低一些产量。
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